Gripo virusai atsakingi už dalį ŪRS, kurie sudaro daugiau nei 60% susirgimų sezoninės epidemijos metu, ypač vaikų tarpe. Tarpepideminiu laikotarpiu jie sąlygoja 5-15% ŪRS atvejų. Gripas dėl galimų įvairių komplikacijų ypač pavojingas pagyvenusio amžiaus žmonėms (virš 65 metų amžiaus, sergantiems lėtinėmis ligomis).
        Pasaulyje gripo pandemija kyla kas 10-50 metų. Per paskutinių 400 metų laikotarpį užregistruota apie 30 pandemijų. XX amžiuje kilo 3 pandemijos: 1918 m. - H1N1, 1957m. - H2N2, 1968 m. - H3N2.
        Pastaraisiais metais pasaulyje daugiausia nerimauta dėl pandemijos, kurią gali sukelti paukščių gripo virusas H5N1. Dabar jau kalbama apie naują gripo pandemiją – naują A gripo virusą H1N1. Todėl labai aktualu ieškoti naujų priešvirusinių priemonių (gripo virusas greitai kinta, atsiranda rezistentiški štamai esamiems priešgripiniams preparatams), o taip pat nepamiršti senų, laiko patikrintų ir jau moksliškai pagrįstų kompleksinių homeopatinių preparatų.
      Kompleksinis homeopatinis preparatas INFLUCID (nuo 1928m. plačiai vartojamas pasaulyje) skirtas peršalimo ligų, kurių metu karščiuojama, gydymui ir profilaktikai. Į INFLUCID sudėtį įeina homeopatiniai prepratai: Aconitum D3, Gelsemium D3, Ipecacuanha D3, Phosphorus D5, Bryonia D2, Eupatorium perfoliatum D1. INFLUCID veikia greitai, veiksmingai gydo uždegimą, mažina silpnumą, galvos ir raumenų skausmus, gydo slogą, kosulį, stiprina apsaugines organizmo galias.

 

 

Preparato INFLUCID priešvirusinio poveikio žmogaus ir paukščių gripo virusams tyrimai in vitro ir in vivo

 

Preparato INFLUCID priešvirusinis efektyvumas modeliuojamose sistemose

M.J.Jeropkin, V.A.Grigorjeva, T.M.Gubkova, N.I.Konovalova, T.G.Lobova, D.M. Baibus, I.B.Jaglovskaja
Rusijos medicinos mokslų akademijos gripo mokslinių tyrimų instituto virusologinė laboratorija, Sankt Peterburgas

         Pateikiame sutrumpintą 2007 metų tyrimo aprašymą.
         Tyrimo tikslas – ištirti preparato INFLUCID priešvirusinį poveikį. Buvo tirti aktualiausi žmogaus ir paukščių gripo virusų štamai. Tyrimai atlikti su ląstelių kultūromis (in vitro) ir pelėmis (in vivo). Buvo pasirinkta skysta INFLUCID forma, kadangi ji labiau tinka modeliuojamiems tyrimams.

 

 

INFLUCID priešvirusinio veikimo tyrimas in vitro

 

 

              Bet kokių tyrimų in vitro būtina sąlyga – nustatyti tiriamo preparato galimą toksiškumą testuojamoms ląstelėms.

1 pav. Influcid saugumo įvertinimo in vitro schema:

Preparato praskiedimas 1:25 – 1:400
↓
Paruošto preparato įlašinimas į duobutes su ląstelių kultūromis MDCK*
↓
72 valandų trukmės inkubacinis periodas
↓
Ląstelių gyvybingumo įvertinimas fluorimetriniu testu

 

          Influcid saugumo įvertinimo rezultatas – Influcid nėra toksiškas epitelinių ląstelių kultūroms.

          Influcid priešvirusinio veikimo tyrimas in vitro buvo atliekamas su epitelinių ląstelių kultūromis MDCK.

2 pav. Influcid priešvirusinio veikimo tyrimo in vitro schema:

Ląstelių kultūros infekuojamos gripo virusu
↓
Nesusijungusių su ląstelėmis virusų pašalinimas
↓
INFLUCID preparato įvedimas
↓
72 valandų trukmės inkubacinis periodas
↓
Viruso reprodukcijos įvertinimas pagal hemagliutinacijos reakciją

 

         Tirti įvairūs A ir B tipo žmogaus gripo virusai: A/Naujoji Kaledonija/20/99 (H1N1), A/Viktorija/35/72(H3N2), A/Viskonsin/67/05 (H3N2), B/Malaizija/2506/04 ir paukščių gripo virusai: A/NIBRG-14 (H5N1) (vakcininis štamas, kilęs iš A/Vietnamas/1194/04), A/Antis/Potsdam/1402/6/86 (H5N2), A/Didžioji antis/NT/12/02 (H7N3) ir A/Honkongas/1073/99 (H9N2).

1 lentelė. Influcid priešvirusinio veikimo in vitro įvertinimas:
Žmogaus gripo virusų štamai                        ΔlgLD50 **
A/Naujoji Kaledonija/20/99 (H1N1)                  1,5mmiimi
A/Viktorija/35/72(H3N2)                                       2,5mimmi
A/Viskonsin/67/05 (H3N2)                                  1iiiiiiiiiiiiim
B/Malaizija/2506/04                                              2iiiiiiimmii

 

2 lentelė. Influcid priešvirusinio veikimo in vitro įvertinimas:
Paukščių gripo virusų štamai                          ΔlgLD50
A/NIBRG-14 (H5N1)                                                  1mim
A/Antis/Potsdam/1402/6/86 (H5N2)                       0,5mi
A/didžioji antis/NT/12/02 (H7N3)                             0mm
A/Honkongas/1073/99 (H9N2)                                0mm

              Kaip matome 1-oje ir 2-oje lentelėse, preparatas INFLUCID pasižymi geru priešvirusiniu poveikiu žmogaus gripo A/Viktorija/35/72(H3N2) ir B/Malaizija/2506/04 virusų štamams (geru laikomas priešvirusinis efektyvumas, jeigu ΔlgLD50 ≥2,0, t.y. viruso titras sumažėja ≥ 100 kartų ).
            Preparatas INFLUCID pasižymi vidutiniu priešvirusinu poveikiu kitiems žmogaus gripo viruso štamams A(H1N1), A(H3N2) ir paukščių gripo A(H5N1) štamui.
            Vertinant tyrimo in vitro rezultatus, reikėtų atkreipti dėmesį, kad kompleksiniai homeopatiniai preparatai veikia visą organizmą, o virusinės infekcijos modelis ląstelių kultūrose negali atspindėti visų organizmo apsauginių reakcijų galimybių. Todėl logiška, kad tolimesni tyrimai, testuojant INFLUCID, buvo atlikti su gyvūnais.

 

INFLUCID priešvirusinio veikimo tyrimas in vivo

 

 

            Preparato INFLUCID priešvirusinis veikimas buvo vertinamas atliekant bandymus su baltosiomis pelėmis (4 savaičių amžiaus, 15-20g svorio, užaugintos „Rappolovo“ veislyne). Tyrimas atliktas su viruso štamu A/Puerto Riko/8/34 (H1N1). Neatsitiktinai pasirinktas būtent šis viruso štamas - jis sukelia pelėms letalinę infekciją. Tyrimas atliktas pagal Rusijos Sveikatos apsaugos ir Socialinės rūpybos ministerijos rekomendacijas.
           Būtinas tyrimo in vivo etapas – nustatyti vidutinę letalinę viruso dozę pelėms. Pelės buvo infekuotos trijų skirtingų praskiedimų virusu (kiekvienam praskiedimui - 10 pelių). Po to 8 dienas pelės buvo stebėtos vivariume, registruotos nudvėsusios. Buvo nustatytas viruso kiekis, kuriuo infekavus žūva pusė gyvūnų (LD50) – vidutinė letalinė viruso dozė.
Tolimesniam tyrimui buvo paimta 40 pelių:

• kontrolinė grupė, infekuota LD50 viruso doze,
  
• INFLUCID grupė, infekuota LD50 viruso doze,
  
• kontrolinė grupė, infekuota 0,1 LD50 viruso doze,
  
• INFLUCID grupė, infekuota 0,1 LD50 viruso doze.
  

           Preparatas INFLUCID pagal profilaktinę gydymo schemą buvo įvestas 5 kartus (likus 24 valandoms ir 1 valandai iki užkrėtimo virusu, ir praėjus 24, 48, 72 valandoms po užkrėtimo virusu). Ši schema leidžia vienu metu stebėti ir profilaktinį, ir gydomąjį preparato poveikį.
Po užkrėtimo virusu pelės stebėtos 9 paras:

• LD50 viruso doze infekuotų pelių kontrolinėje grupėje nudvėsė 50% pelių, o INFLUCID grupėje – 30%,
  
• 0,1LD50 viruso doze infekuotų pelių kontrolinėje grupėje nudvėsė 40% pelių, INFLUCID grupėje – tik 10%.

         Duomenys išnagrinėti regresinės analizės ir neparametriniu (Wald-Wolfowitz testas) metodu. Preparato INFLUCID efektyvumas įrodytas.

 

Apibendrinimas

           Patvirtintas Influcid priešvirusinis veikimas in vivo ir in vitro.
In vitro įrodytas preparato INFLUCID priešvirusinis veikimas.
Preparatas INFLUCID gerai veikia žmogaus B tipo ir A tipo (H3N2) virusų štamus, taip pat vidutiniškai veikia žmogaus A tipo (H1N1) bei paukščių А tipo (Н5N1)‏ virusų štamus.
In vivo įrodytas preparato INFLUCID ne tik gydomasis, bet ir profilaktinis poveikis.

 

* MDCK - Madin Darby Canine Kidney (epitelinių ląstelių kultūros)
** ΔlgLD50 - viruso titro mažėjimas lyginant su kontroline grupe

 

Literatūra:

1. Гаращенко Т.И. Комплексные гомеопатические препараты в лечении воспалительных заболеваний ЛОР-органов // Русский Медицинский Журнал – 2002- Т.20. - № 10.
2. Еропкин М.Ю., Гудкова Т.М., Коновалова Н.И. и др. Противовирусное действие некоторых антиоксидантов / антигипоксантов, а также их комбинаций с ремантадином в отношении вируса гриппа человека А (Н3N2) на модели in vitro. // Эксп. Клинич. Фармакол.: - 2007 – Т.70. – №5. – С. 33 – 37.
3. Ильенко В.И. (ред.). Методы испытания и оценки противовирусной активности новых препаратов в отношении вируса гриппа. – Л.1973. – 36 С.
4. Онищенко Г.Г., Киселёв О.И., Соминина А.А. Усиление надзора за гриппом как важнейший элемент подготовки к сезонным эпидемиям и очередной пандемии. М. – Спб., 2004.
5. Покровский В.И. (ред.). Грипп птиц: происхождение инфекционных биокатастроф. Спб., «Росток», 2005.
6. Хабриев Р.У.(ред.).
Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. – М. 2005 – С. 532-557.